ABSTRACT Human cytomegalovirus (HCMV) infections remain a neglected public health issue. The aim of the present study was to evaluate the frequency of HCMV congenital infections in newborns up to 1 month in the Sao Paulo State, from 2010 to 2018. The molecular characterization of HCMV-positive samples was also undertaken. Urine samples from 275 potential congenital HCMV-infected patients were tested by real-time Polymerase Chain Reaction (qPCR). HCMV-positive samples were amplified by conventional PCR targeting the UL89 gene, sequenced and searched for mutations. A total of 32 (11.6%) positive-HCMV cases were detected (mean Ct 30.59); mean and median age of 10.3 and 6 days old, respectively. Children aged between 0-3 weeks had higher HCMV detection rates (84.4%; 27/32). UL89 gene was successfully sequenced in two samples, both classified as the human betaherpesvirus 5. No described resistance-associated mutations were identified. A routine screening in newborns coupled with the genetic characterization of key viral genes is vital to decrease sequels associated with congenital HCMV infections.

ABSTRACT A great variety of viruses which cause exanthema share other clinical manifestations, making the etiologic identification a very difficult task, relying exclusively on the clinical examination. Rubella virus (RV) infection during the early stages of pregnancy can lead to serious birth defects, known as congenital rubella syndrome (CRS). In the present report, we described the presence of Zika virus (ZIKV) particles in urine samples and also ZIKV isolation in SIRC cells from the urine of a patient in acute phase of suspected rubella disease. The 50-year-old unvaccinated woman living in Sao Paulo, Brazil, was admitted to the emergency room with fever, headache, rash, arthralgia and prostration. Urine samples were collected for virus isolation and RT-qPCR. SIRC and Vero cells were inoculated with urine samples during 7 days. RT-qPCR was performed using measles virus (MV) and RV primers and both were found to be negative. After this result, RT-qPCR was performed for parvovirus B19, herpes virus 6 and ZIKV. The urine sample and the isolate were positive by Real Time PCR for ZIKV and negative for all other viruses tested. The sequences isolated are from the Asiatic lineage.

Resumo Introdução: Estratégias de vigilância para o parvovírus humano B19 e caracterização genética são ferramentas importantes para o controle regional e global do surto viral. Em São Paulo, Brasil, foi realizado um estudo de parvovírus B19, monitorando a disseminação desse vírus, que é um agente infeccioso e poderia ser erroneamente relatado como uma erupção cutânea e outros tipos de infecções. Método: As amostras de soro foram submetidas ao ensaio imunoenzimático, PCR quantitativo em tempo real e sequenciamento. Resultados: Dos 462 pacientes com casos suspeitos de infecções exantemáticas, os resultados das 164 amostras de soro foram positivos para parvovírus B19 imunoglobulina M. Entre eles, 38 pacientes com eritema infeccioso apresentaram B19 associado com outras infecções, como encefalite, hidropisia fetal, anemia crônica, doenças hematológicas malignas. Essas amostras foram sequenciadas e identificadas como genótipo 1. Conclusão: Os pacientes foram infectados com parvovírus B19 e apresentaram genótipo 1. Monitoração contínua é necessária para detectar todos os genótipos conhecidos e o surgimento de novos genótipos para o controle de casos em saúde pública.

Summary Introduction: Virus surveillance strategies and genetic characterization of human parvovirus B19 (B19V) are important tools for regional and global control of viral outbreak. In São Paulo, Brazil, we performed a study of B19V by monitoring the spread of this virus, which is an infectious agent and could be mistakenly reported as a rash and other types of infection. Method: Serum samples were subjected to enzyme immunoassay, real time polymerase chain reaction, and sequencing. Results: From the 462 patients with suspected cases of exanthematic infections, the results of the 164 serum samples were positive for B19V immunoglobulin M. Among these cases, there were 38 patients with erythema infections and B19-associated with other infections such as encephalitis, hydrops fetalis, chronic anemia, hematological malignancies. These samples were sequenced and identified as genotype 1. Conclusion: This study showed patients with infections caused by B19V and sequencing genotype 1. Continuous monitoring is necessary to detect all known genotypes, and the emergence of new genotypes of these viruses for case management in public health control activities.

As pastagens naturais e biodiversas que suportam a pecuária extensiva são caracterizadas por marcada variação da biomassa das espécies botânicas presentes, e do seu estado fenológico ao longo das estações do ano. Nestas circunstâncias, a utilização do alimento e a ocupação do espaço da pastagem podem ser muito heterogéneas devido, entre outras causas, ao comportamento de pastoreio dos ruminantes. Uma gestão eficiente do pastoreio exige conhecimento sobre o mecanismo de ajuste do comportamento de pastoreio à pastagem. Embora exista tecnologia GNSS que possibilita a monitorização do comportamento de pastoreio, o seu custo de aquisição é elevado, limitando a sua aplicação a ensaios científicos. O presente trabalho revê os princípios que permitem a aplicação desta tecnologia e tem por objectivo estudar a utilização de recetores GNSS comerciais de baixo custo ("commercial of the shelf - COTS”: CatTrackTM). Foram utilizados seis recetores, durante seis períodos de recolha de dados, ao longo de dois meses de pastoreio contínuo de uma pastagem natural tendo sido a exactidão dos recetores de 14m e de 40m em testes estáticos e dinâmicos, respectivamente, a precisão de 3m e a fiabilidade de 80%. O equipamento testado permitiu diferenciar as actividades dos animais (pastoreio, repouso e trânsito), determinar a localização de ovinos em pastoreio, e caracterizar padrões, percursos e zonas preferenciais. Conclui-se que o equipamento COTS apresenta uma elevada relação qualidade/preço, pelo que pode vir a ser uma ferramenta importante para suporte das decisões que são essenciais a um maneio mais preciso da pastagem.

Extensive livestock production is supported by natural and biodiverse pastures, characterized by marked seasonal variation of biomass, plant species and growth stage. The use of the food resources and the occupation of grazing space can be very heterogeneous in such conditions due to ruminants grazing behaviour. Successful grazing and pasture management requires an understanding of the adjustment mechanism behind the grazing behaviour that enables adaptation to grazing conditions. Use of GNSS technology allows grazing data collection but although available, is expensive, limiting its application for research purposes. This paper reviews the principles for the application of this technology and was designed to study the use of inexpensive commercial GNSS receptors (commercial of the shelf - COTS: CatTrackTM"). Six receivers were used for six period’s collection data over two months of continuous grazing on a natural pasture. The accuracy of the receivers is 14m and 40m in static and dynamic tests, respectively. The precision was 3m and the reliability 80%. The tested equipment differentiates between animal activities (grazing, resting and transit). It also determines sheep locations, allowing the characterization of patterns, pathways and preferred areas. It is concluded that the COTS equipment has a high quality / price ratio, so it can become an important tool to support the decisions that are essential to a more precise pasture management.

Objetivo: a rubéola, durante os primeiros estágios da gravidez, pode levar a graves defeitos congênitos, conhecidos como síndrome da rubéola congênita (SRC). Amostras de gestantes com sintomas e suspeitas da rubéola congênita foram coletadas entre 1996 e 2008. Métodos: um total de 23 amostras de fluido amniótico, 16 amostras de sangue fetal, um produto da concepção e uma placenta foram analisados por sorologia e PCR. Resultados: todas as gestantes apresentaram sorologia positiva para IgG/IgM para o vírus da rubéola. Entre os recém-nascidos, 14 apresentaram anticorpos IgG positivos e 11 foram os anticorpos IgM positivos. Das 25 amostras analisadas neste estudo, 24 eram positivas por RT-PCR. Alterações na ultrassonografia foram encontradas em 15 (60%) dos 25 fetos infectados com o vírus da rubéola. Morte fetal e aborto espontâneo foram reportados em 10 (40%) dos 25 casos analisados. O vírus da rubéola foi amplificado por PCR em todos os fetos que apresentaram alterações na ultrassonografia, compatíveis com a rubéola. Morte fetal e aborto foram relatados em 10 dos 25 casos analisados. Conclusão: os resultados mostraram que os ensaios moleculares são ferramentas importantes para o diagnóstico precoce da rubéola e da síndrome da rubéola congênita.

Objective: rubella during the early stages of pregnancy can lead to severe birth defects known as congenital rubella syndrome (CRS). Samples collected from pregnant women with symptoms and suspected of congenital rubella infection between 1996 and 2008 were analyzed. Methods: a total of 23 amniotic fluid samples, 16 fetal blood samples, 1 product of conception and 1 placenta were analyzed by serology and RT-PCR. Results: all patients presented positive serology for IgG / IgM antibodies to rubella virus. Among neonates, 16 were IgG-positive, 9 were IgM-positive and 4 were negative for both antibodies. Of the 25 samples analyzed in this study, 24 were positive by RT-PCR. Changes in ultrasound were found in 15 (60%) of 25 fetuses infected with rubella virus. Fetal death and miscarriage were reported in 10 (40%) of the 25 cases analyzed. The rubella virus was amplified by PCR in all fetuses with abnormal ultrasound compatible with rubella. Fetal death and abortion were reported in 10 of 25 cases analyzed. Conclusion: this study, based on primary maternal rubella infection definitely confirms the good sensitivity and specificity of RT-PCR using amniotic fluid and ultrasound. The results showed that molecular assays are important tools in the early diagnosis of rubella and congenital rubella syndrome.

Este trabalho teve por objetivo avaliar o efeito de diferentes agentes carreadores (Maltodextrina 5DE, Maltodextrina 10DE, Goma arábica e Capsul®) nas características físico-químicas (umidade, densidade, solubilidade, teor de antocianinas e atividade antioxidante) da polpa de morango desidratada por atomização e armazenada à temperatura ambiente por 90 dias. A utilização dos diferentes agentes carreadores resultou em pós com valores de densidade aparente entre 0,40 e 0,52 g/cm³ e umidade menor do que 2,5%. Todas as amostras foram altamente solúveis, mas os pós obtidos com a Maltodextrina 5DE e com a Goma arábica apresentaram menor higroscopicidade. As isotermas de sorção obtidas foram do tipo III e o modelo de GAB foi o que melhor se ajustou aos dados experimentais. A amostra produzida com goma arábica apresentou a maior concentração de antocianinas e, consequentemente, maior valor de atividade antioxidante, tanto imediatamente após a secagem como ao longo de 90 dias de armazenamento. Os resultados obtidos indicaram que a goma arábica foi o agente carreador mais adequado para a produção de polpa de morango em pó.

This study aimed to evaluate the effect of different carrier agents (5DE Maltodextrin, 10DE Maltodextrin, gum Arabic and Capsul®) on the physicochemical characteristics (moisture content, density, solubility, total anthocyanins and antioxidant activity) of strawberry pulp processed by spray drying and stored at room temperature for 90 days. The use of different carrier agents resulted in powders with bulk densities ranging from 0.40 to 0.52 g/cm³ and moisture contents below 2.5%. All the samples were highly soluble, but the powders obtained with 5DE Maltodextrin and gum Arabic were less hygroscopic. The sorption isotherms were of type III and the GAB model was the model that best fitted the experimental data. The powder produced with gum Arabic had the highest anthocyanin content and consequently the greatest antioxidant activity value, both immediately after the drying process and during the storage period. The results obtained showed that gum Arabic was the most suitable carrier agent for the production of strawberry pulp powder.

In this paper, we analysed the haemagglutinin (HA) gene identified by polymerase chain reaction from 90 influenza A H1N1 virus strains that circulated in Brazil from April 2009-June 2010. A World Health Organization sequencing protocol allowed us to identify amino acid mutations in the HA protein at positions S220T (71%), D239G/N/S (20%), Y247H (4.5%), E252K (3.3%), M274V (2.2%), Q310H (26.7%) and E391K (12%). A fatal outcome was associated with the D239G mutation (p < 0.0001). Brazilian HA genetic diversity, in comparison to a reference strain from California, highlights the role of influenza virus surveillance for study of viral evolution, in addition to monitoring the spread of the virus worldwide.

A infecção por parvovírus humano B19 é um dos responsáveis pela hidropsia fetal. A infecção materna causada pelo vírus pode ser sintomática ou assintomática. Neste estudo 40 mulheres com idade gestacional de aproximadamente 25 semanas, diagnóstico pré-natal de hidropsia fetal e suspeita de infecção por parvovírus humano B19 foram avaliadas durante o período de janeiro de 1999 a dezembro de 2005. Os resultados de sorologia e detecção de DNA no soro materno, fetal e fluido amniótico confirmaram 20 mulheres grávidas com infecção por parvovírus humano B19. A análise de ultra-som demonstrou hidropsia fetal, anemia, hepatosplenomegalia, ascite, cardiopatia e desordens amnióticas. Entre os casos positivos, ocorreram três perdas fetais: uma por aborto e duas por morte fetal intra-uterina.

Human parvovirus B19 infection is known to be one of the causes of hydrops fetalis. The maternal infection caused by the virus may be symptomatic or asymptomatic. In this study, 40 pregnant women with gestational age of approximately 25 weeks, prenatal diagnosis of non immune hydrops fetalis and suspected of human parvovirus B19 infection were studied between January 1999 and December 2005. Serology results and detection of DNA in the maternal serum, foetal serum and amniotic fluid confirmed that 20 pregnant women had been infected by human parvovirus B19. The ultrasound examination demonstrated foetal hydrops, anaemia, hepatosplenomegaly, ascites, cardiopathy and amniotic fluid disorders. Among the positive cases, there were three fatal losses, one by miscarriage and two by intrauterine foetal death.

A palmeira ráfia (Rhapis excelsa), possui elevado valor comercial, sendo utilizada na composição de vasos e jardins, principalmente em interiores. No entanto, poucas são as informações sobre sua exigência em adubação ou mesmo sobre as condições ótimas de sombreamento. Para sombreamento, além do tradicional sombrite, estão disponíveis atualmente no mercado as malhas fotoconversoras, que estimulam o desenvolvimento das espécies vegetais. Objetivou-se nesse trabalho avaliar a influência de diferentes porcentagens e tipos de sombreamentos e a nutrição foliar no desenvolvimento de mudas desta palmeira. Utilizaram-se plantas com aproximadamente 4 anos, em vaso contendo terra, areia e esterco (1:1:1), acrescido de 10 g de superfosfato simples por litro de substrato. Determinou-se o incremento em altura e o número de folhas aos 105 e 195 dias. Foi determinado também o número e altura dos brotos, largura do folíolo e altura final das plantas aos 195 dias. Em relação à adubação foliar, não foi observado efeito dessa sobre o desenvolvimento das mudas. As malhas para sombreamento também não exerceram efeitos significativos na altura final de plantas, indicando que o desenvolvimento das mudas de palmeira ráfia pode ser realizado sob qualquer tipo de sombreamento.

Lady palm (Rhapis excelsa) has high commercial value, specially in ornaments of vases and gardens located on shade. However, the information about its requirements in fertilizer and great terms of shading are little. To shade, the common used material is shade net black. The color shade net stimulate the vegetal growth and it is recently used in the commercial system. The aim of this work was to evaluate the influence of different percents and types of shades and foliar fertilizer in development of seedlings this palm. The plants used in this experiment were cultivated in recipients with soil, organic matter and sand (1:1:1), with the addition of 10 g of fertilizer by liter of substrate. These plants were four years old approximately. The measurements of increasing of height and number of leaves were taken at 105 and 195 days since the beginning of the experiment. It was also observed the number and height of seedlings, width from leaflets, as well as the final plant height at 195 days. The foliar fertilizer was not affected in growth of seedlings. The different types of screening either affect significantly the final height of the plants, indicating than the growth of palm Rhapis can be under any kind of shade.

Foi realizado estudo comparativo na produção de diferentes antígenos virais usando sistema de microcarregador e sistema tradicional. Células Vero, BHK e MA-104 foram cultivadas em microcarregadores (2mg/ml) utilizando-se biorreatores com capacidade de 3,7 litros e, em paralelo, no sistema convencional com garrafas Roux. Após quatro dias de cultura para as células BHK e sete dias para as células Vero e MA-104, as células foram infectadas com 0,1 MOI (multiplicidade de infecção) de vírus da raiva, vírus do sarampo, poliovírus e rotavírus. Foi determinado o rendimento das células e dos vírus em microcarregadores e sistema convencional. Foi observado no sistema de microcarregador um aumento médio obtido de vinte vezes mais células/ml em relação à cultura convencional em monocamadas, usando garrafas Roux. Por outro lado, as células que cresceram em garrafas Roux apresentaram 1,6 a 6,7 mais vírus/ml em culturas do que no sistema de microcarregador. Contudo o total das amostras em termos de vírus por grupo foi estatisticamente similar para ambos os sistemas (p > 0,05). O rendimento na produção de antígeno viral pode depender não somente da concentração das células, mas também de outros fatores da cultura, como características do suporte no crescimento. Assim, o estudo deste parâmetro pode proporcionar uma linha de base para um futuro melhoramento e estratégias para se estabelecer um aumento em escala na produção de vírus, já que, dependendo do tipo de vírus, a ótima condição encontrada para uma produção de vírus em pequena escala pode não ser adequada para a produção em grande escala, requerendo novas padronização e avaliação.

A comparative study was performed in the production of different viral antigens by using microcarrier systems and traditional systems. Vero, BHK and MA 104 cells were cultivated in microcarriers (2mg/ml) using a bioreactor with a working capacity of 3.7 liters, in parallel with conventional Roux bottles. After four days (BHK cells), and seven days of culture (Vero and MA-104 cells), the cells were infected with 0.1 MOI (multiplicity of infection) of rabies virus, measles virus, poliovirus and rotavirus. The yields of the cells and virus in microcarriers and in the conventional system were determined. It was observed that in the microcarrier system, an average increase of twenty-fold more cells/ml was obtained in relation to the conventional monolayer culture, using Roux bottle. On the other hand, cells grown in Roux bottles presented 1.3 to 6.7 more viruses/ml culture than those in the microcarrier systems. However, the overall data showed that yieldings, in terms of viruses per batch, were statistically similar for both systems (p > 0.05). The amount of viral antigen production seems to depend not only on cell concentration, but also on other culture factors such as the characteristic of the cell-growth surface. Thus, the present findings provide a baseline for further improvements and strategies to be established for a scaling-up virus production since depending on the type of virus the optimal conditions found for a small-scale virus production seem unsuitable for large-scale production, requiring new standardization and evaluation.

Recentes epidemias de sarampo em diferentes países induziram aumento de sorodiagnóstico do sarampo, inclusive em laboratórios de saúde pública brasileiros. Desta forma, desenvolvemos uma técnica de ELISA IgM IAL, utilizando antígenos de vírus do sarampo obtidos de células cultivadas em microcarregadores, com o objetivo de fornecer "kits" de reagentes para diferentes laboratórios. Foi produzida uma partida de reagente para esta técnica imunoenzimática, e os parâmetros diagnósticos foram avaliados em comparação com dados clínicos e de ensaio de referência (ELISA de captura IgM). O reagente foi estudado em um painel positivo tendo 70 soros de pacientes com sarampo e painel negativo com 132 soros de pacientes com doenças não relacionadas e sem história de sarampo recente ou vacinação. A técnica de ELISA IgM IAL demonstrou sensibilidade de 97,1% e 98,6%, especificidades de 97%, e índices kapa de concordância de 0,94 e 0,95 (p < 0,05). O perfil de anticorpo IgM de sarampo da fase aguda foi também semelhante ao do ensaio de referência. Foi proposto ainda um sistema prático de análise para o controle de qualidade de reagentes com bases nos achados de validadação do reagente. Nossos achados sugerem que partidas de reagentes do vírus do sarampo podem ser produzidas sucessivamente e utilizadas em laboratórios de saúde pública para sorodiagnóstico de rotina ou inquérito soroepidemiológico de população.

Recent measles outbreaks in different countries led to an increase of laboratory measles diagnosis. Thus, we developed the IgM-Measles ELISA IAL, using measles virus antigens obtained from cell cultured in microcarriers in order to supply reagent kits to Brazilian public health laboratories. A batch of antigenic reagent was produced and evaluated in the enzyme immunoassay in comparison with clinical diagnosis and with as reference assay (IgM Capture ELISA CDC) data. This study was performed in a positive panel with 70 serum samples from patients with measles, and a negative panel with 132 samples from patients with unrelated diseases and without recent measles or vaccination history. In relation to other diagnostic methods, the IgM ELISA IAL presented sensitivity higher than 97.1%, specificity and precision of 97%, and agreement kappa (k) index higher than 0.94 (P < 0.05). Moreover, the IgM antibody profile from measles acute phase revealed by the assay was similar to the reference assay. A practical analysis system for checking the quality of new reagent batches was proposed based on the diagnostic features and agreement kappa index. Our findings suggest that measles antigenic reagents can be produced with reliable quality control system, and supplied to public health laboratories for routine serodiagnosis or population surveys.